熒光定量Q-PCR檢測(cè)的取樣及運(yùn)輸須知
熒光定量Q-PCR檢測(cè)是利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，通過(guò)Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的關(guān)系對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析。
它的擴(kuò)增曲線(xiàn)反應(yīng)了Q-PCR動(dòng)態(tài)進(jìn)程的曲線(xiàn)。
熒光閾值：前15個(gè)循環(huán)信號(hào)作為熒光本底信號(hào)，熒光閾值的默認(rèn)設(shè)置是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍，如果手動(dòng)設(shè)置則設(shè)置大于熒光背景值和陰性對(duì)照的熒光高值，進(jìn)入指數(shù)期的初階段。
CT值：PCR擴(kuò)增過(guò)程中，擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)過(guò)的擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)。
Q-pcr的取樣及運(yùn)輸事項(xiàng)：
一、細(xì)胞收集及保存
1.貼壁細(xì)胞胰酶消化后900轉(zhuǎn)5min離心至管底（非貼壁細(xì)胞直接離心），棄上清，將細(xì)胞凍存與-80度長(zhǎng)期保存，-20度，暫時(shí)保存。若用于Q-PCR盡量使用滅菌無(wú)RNA酶離心管，RNA樣本保存液中-80度長(zhǎng)期保存。
2.組織樣本取樣后立即-80或者液氮保存。后續(xù)用于Q-PCR的取樣后立即存于液氮或者-80度環(huán)境中，或者放于有RNA樣本保存液的滅菌無(wú)RNA酶離心管中-80度保存。
二、樣本運(yùn)輸
短時(shí)2h左右冰袋或者液氮運(yùn)輸，干冰（干冰可以維持-70度）密封運(yùn)輸。
三、樣本編號(hào)
樣本標(biāo)號(hào)清晰，須提供樣本清單。
病理實(shí)驗(yàn)取樣及實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1.動(dòng)物組織提取后（玉米粒大小即可）迅速保存于4%多聚甲醛中固定，管體標(biāo)號(hào)，組織塊盡量少帶血液，或可以用多聚甲醛將樣本稍作清洗，常溫保存，常溫運(yùn)輸。做電鏡的樣本由2.5%戊二醛固定于15ml離心管內(nèi)，樣本直徑小于2mm，常溫保存常溫運(yùn)輸。
2.細(xì)胞樣本制作成爬片后PBS浸潤(rùn)保存與細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，密封常溫運(yùn)輸。做電鏡的細(xì)胞離心收集好后2.5%戊二醛固定，常溫運(yùn)輸。
